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【技術在線】使用Cygnus ELISA試劑盒該如何設置空白對照?

空白對照的定義及其在ELISA測定中的應用

空白對照是指在實驗設計中設置的一種陰性對照,旨在監測非特異性背景信號,并為基線吸光度值提供參考。在酶聯免疫吸附測定(ELISA)中,通過引入空白對照,可以有效識別并扣除樣品讀數中的背景噪聲,從而提高檢測結果的準確性。然而,在多分析物ELISA測定中,由于其固有的高背景信號特性,這種標準化方法可能并不適用。本文將詳細探討為何在Cygnus的ELISA測定中通常不建議使用空白對照。


減去背景值對多分析物ELISA檢測結果的影響

在多分析物ELISA測定中,如HCP ELISA,由于HCP抗體的復雜性,其背景信號通常較高。這使得此類檢測的基線吸光度值(OD值)普遍高于簡單的單分析物檢測。從統計學角度來看,從樣品讀數中減去較高的基線OD值可能會增加數據的變異程度,從而影響結果的準確性和可靠性。

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以下示例說明了背景值扣除對變異系數的影響。在表1中,標準A的平均OD值為0.100,標準B的平均OD值為0.150 。當通過原始讀數減去空白對照的OD值來計算變異系數(CV)時,CV值顯著上升,導致標準B的CV%從6.7%增加至20%。



表1. 背景值扣除對變異系數的影響


檢測背景值越高,對變異系數百分比的影響就越大。


表2展示了8種不同ELISA試劑盒在10組隨機數據集中的平均變異系數(CV%)。基于原始OD值計算得出的CV%范圍為10%至20%,而經過空白對照校正后的相同數據CV%則超過了20%。在所有情況下,經過空白對照校正后的CV%均高于未校正的數據。在實際應用中,分析數據放行的標準通常要求重復檢測的CV%不超過20%,上述差異可能直接導致分析結果無法滿足精密度要求,從長遠來看,引入空白對照將直接導致測試結果無法符合放行要求。


表2. 經過空白對照校正后的CV%與未校正數據的CV%值對比



從統計學角度來看,空白對照的OD值越高,出現此類問題的可能性就越大。

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鑒于上述原因,Cygnus Technologies 致力于開發和提供無需背景校正的 ELISA 試劑盒。在我們已上市的 ELISA 試劑盒開發、分析及測試過程中,從未在批次放行的工作流程中引入空白對照校正步驟。相反,我們使用 0 ng/mL 標準品來設定 Y 軸截距并確定標準曲線的下限。因此,如果您在實驗流程中加入了空白對照校正步驟,其獲得的檢測變異系數(CV)百分比很可能會高于 Cygnus 質控團隊所記錄的結果。Cygnus針對每一種檢測試劑盒均提供相應的QS(Qualification Summary)文件,如有需求歡迎點擊這里填寫信息索取,或直接聯系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過程中遇到任何問題,我們的技術支持團隊將竭誠為您提供解決方案和建議。


Cygnus Technologies專注為生物技術和生物制藥行業提供產品和分析方法超過25年,旨在加速研發階段和提高產品質量。Cygnus開發和生產的生物工藝殘留試劑盒,用于檢測超過50種不同表達系統的特異性雜質。Cygnus作為專注于生物技術應用免疫檢測的高靈敏度分析技術的專家,其產品和服務已經被全球超過95%以上生物制藥公司使用,并獲得FDA、NMPA、EMA等監管機構的廣泛認可。

北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理,與國內眾多知名藥企,CRO/CMO企業建立了長久穩定的合作關系。多年來西美杰的產品及服務幫助許多企業加速R&D階段,提高藥物質量、純度和安全,加速優化研發工藝,減少產品上市時間,降低QC成本。如您對上述產品感興趣,歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網站www.33ql.cn了解更多信息。

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